詳細(xì)內(nèi)容

　　緩沖液、RIPA裂解液(強(qiáng),無抑制劑)

　　規(guī)格：100ml 500ml

　　產(chǎn)品名稱：RIPA裂解液(強(qiáng)無抑制劑)

　　保質(zhì)期：1年

　　保存條件：-20℃

　　簡介：

　　多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白，例如 Triton、SDS、NP-40 等。RIPA 裂解液(強(qiáng))(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解，并獲得總蛋白的裂解液，其裂解強(qiáng)度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中)。Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors 主要由 Tris 、NP-40、 sodium deoxycholate 等組成，不含蛋白酶和磷酸酶抑制劑，并維持原有的蛋白間相互作用。

　　組成：

　　保存條件：

　　-20℃保存，一年有效。

　　操作步驟(僅供參考)：

　　(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

　　1、取 Enhanced RIPA lysis buffer 室溫溶解混勻，根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑。

　　2、去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液，，低速離心，棄上清。

　　3、按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 RIPA Lysis Buffer 。移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解。通常裂解液作用于細(xì)胞 1～3 內(nèi)，細(xì)胞就會被裂解。

　　4、離心(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。

　　5、進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

　　(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

　　1、取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫溶解混勻，根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制

　　劑。

　　2、低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清，收集沉淀。

　　3、用手指輕彈細(xì)胞，使其松散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150～250μl 裂解液的比例，

　　加 入 Enhanced RIPA Lysis Buffer。

　　4、離心(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。

　　5、進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

　　(三)組織樣本

　　1、取 Enhanced Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻，根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑。

　　2、把組織剪切成細(xì)小的碎片，越小越好。取在液氮或超低溫冰箱中冷凍以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白的降解。

　　3、按照每20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解。

　　4、離心(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。

　　5、進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

　　注意事項：

　　1、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。

　　2、 如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。

　　3、 如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50～100 萬細(xì)胞/離心管，然后再裂解。

　　4、 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈Vortex 使樣品裂解充分。

　　5、 溶解 Regal RIPA Lysis Buffer 時，應(yīng)盡量縮短溶解時間，避免有效成分失效。

　　6、 裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。

　　7、 細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或 4℃進(jìn)行。

　　8、本產(chǎn)品僅供科研使用，嚴(yán)禁它用。

　　緩沖液、RIPA裂解液(強(qiáng),無抑制劑)本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。本生移液器吸頭

更新時間：2024/9/18 10:33:12

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