詳細(xì)內(nèi)容

　　人可溶性P選擇素(sP-selectin)elisa試劑盒

　　Elisa kit規(guī)格：48孔配置/96孔配置

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液：1.5ml×1瓶

　　酶標(biāo)試劑：3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)

　　【人可溶性P選擇素(sP-selectin) elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用

　　計算：

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

　　試劑盒組成：

　　封板膜:2片(48)/2片(96)

　　說明書:1份

　　密封袋:1個

　　標(biāo)準(zhǔn)品： 2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

　　酶標(biāo)包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存

　　樣品稀釋液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

　　顯色劑A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

　　顯色劑B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

　　終止液: 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存

　　濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存

　　實驗原理：

　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人可溶性P選擇素(sP-selectin) 水平。用純化的人可溶性P選擇素(sP-selectin) 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入類可溶性P選擇素(sP-selectin) ，再與HRP標(biāo)記的類可溶性P選擇素(sP-selectin) 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的類可溶性P選擇素(sP-selectin) 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人可溶性P選擇素(sP-selectin) 濃度。

　　目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中類可溶性P選擇素(sP-selectin) 的含量。

　　保存條件及有效期：

　　試劑盒保存：2-8℃| 有效期：6個月

　　【人可溶性P選擇素(sP-selectin) elisa試劑盒】樣本處理及要求：

　　1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

　　2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

　　3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

　　4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

　　5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩��?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

　　6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

　　7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

　　操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1800ng/L，1200ng/L ，600ng/L，300ng/L， 150ng/L)。

　　加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

　　洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

　　加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

　　溫育：操作同3。

　　洗滌：操作同5。

　　顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

　　【人可溶性P選擇素(sP-selectin) elisa試劑盒】注意事項：

　　試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

　　濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

　　各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

　　請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

　　封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　底物請避光保存。

　　嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

　　所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

　　本試劑不同批號組分不得混用。

　　10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

　　試劑盒性能：

　　1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

　　2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%

　　檢測范圍：

　　0.2IU/L - 6IU/L

更新時間：2024/10/28 15:36:57

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