詳細(xì)內(nèi)容

RIPA裂解液（強(qiáng)，含PMSF）

產(chǎn)品編號(hào)：PC012                                

英文名：RIPA lysate (strong)                                    

簡(jiǎn)介：

RIPA主要是從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。RIPA裂解液（強(qiáng)）(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解，并獲得總蛋白的裂解液，其裂解強(qiáng)度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(中)。

伊勢(shì)久RIPA裂解液（強(qiáng)，含PMSF）的主要由NP-40、deoxycholate、SDS組成，含蛋白酶抑制劑。由于含有較高濃度的去垢劑，因此不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

組成：

存儲(chǔ)條件：

RIPA裂解液保存于2~8℃。12個(gè)月有效期。

操作步驟(僅供參考)：

無(wú)需配制，直接使用。

(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1、 取Enhanced RIPA lysis buffer室溫溶解混勻，根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑。

2、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液，低速離心，棄上清。

3、 按照6孔板每孔加入150～250 ul含有PMSF的裂解液的比例，加入RIPA Lysis Buffer 。移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解。通常裂解液作用于細(xì)胞1～3內(nèi)，細(xì)胞就會(huì)被裂解。

4、 離心(如無(wú)低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。

5、 進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

1、 取Enhanced RIPA Lysis Buffer室溫溶解混勻，根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑。

2、 低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清，收集沉淀。

3、 用手指輕彈細(xì)胞，使其松散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150～250 ul裂解液的比例，加入Enhanced RIPA Lysis Buffer。

4、 離心(如無(wú)低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。

5、 進(jìn)行后續(xù)的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)組織樣本

1、 取Enhanced Lysis Buffer置于室溫溶解混勻，根據(jù)需要選擇添加或不添加抑制劑。

2、 把組織剪切成細(xì)小的碎片，越小越好。取在液氮或超低溫冰箱中冷凍以上的組織，迅速 用液氮研磨，研磨過(guò)程盡量控制在1～2 min之內(nèi)，以減少蛋白的降解。

3、 按照每20 mg組織加入150～250 ul 裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。

4、 離心(如無(wú)低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。

5、 進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事項(xiàng)：

1、 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不用清洗。

2、 如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。

3、 如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50～100萬(wàn)細(xì)胞/離心管，然后再裂解。

4、 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈Vortex使樣品裂解充分。

5、 溶解伊勢(shì)久RIPA Lysis Buffer時(shí)，應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間，避免有效成分失效。

6、 裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。

7、 細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)在低溫環(huán)境下進(jìn)行。

更新時(shí)間：2024/11/7 10:20:13

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