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　　BUNSEN本生分享：ELISA試驗(yàn)中常見問題原因分析

　　一、ELISA試驗(yàn)中結(jié)果顯色淡、靈敏度品低的原因。

　　1、移液的樣品吸量不足，移液時(shí)抽吸、排放太快，移液嘴內(nèi)壁掛液太多貨內(nèi)壁不清潔，造成加樣量不準(zhǔn)。

　　2、恒溫箱溫度不是37℃(或43℃)，或多塊反應(yīng)板重疊放置造成板孔內(nèi)的實(shí)際溫度偏差，使抗原、抗體復(fù)合物形成過少。

　　3、保溫時(shí)間不足，抗原、抗體反應(yīng)不

　　4、顯色劑加入量不足。

　　5、顯色液的A、B液比例不對(duì)。

　　6、洗滌時(shí)沖擊力過大，洗滌液浸泡時(shí)間太長(zhǎng)，洗滌次數(shù)增加，導(dǎo)致已形成的抗原、抗體復(fù)合物洗脫。

　　7、底物反應(yīng)的溫度不夠，時(shí)間不足。

　　8、試劑盒在運(yùn)輸、保存期間放置的溫度太高、時(shí)間過長(zhǎng)，造成抗原、抗體效價(jià)下降，酶的活力降低。

　　9、試劑盒已超出保存有效期，抗原、抗體效價(jià)下降，酶活力降低。
 

　　二、ELISA試驗(yàn)中結(jié)果出現(xiàn)白板、陽性對(duì)照不顯色的原因

　　1、洗滌液配制有誤。

　　2、終止液誤作為濃縮洗滌液或酶結(jié)合物稀釋液使用。

　　3、漏加酶結(jié)合物，物價(jià)酶結(jié)合物或在酶標(biāo)二抗的試驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)順序錯(cuò)誤。

　　4、終止液當(dāng)做底物緩沖液使用

　　5、配制溶液中殘留了解滅火酶活力的物質(zhì)。

　　6、底物中未加OPD或TMB。

　　7、運(yùn)輸、貯存不當(dāng)，導(dǎo)致沒活力喪失。

　　8、底物液中未加過氧化氫或放置過久過氧化氫失效。

　　三、而莉薩是嚴(yán)重結(jié)果全部顯色的原因

　　1、酶結(jié)合物的濃度過大

　　2、恒溫箱溫度較高，酶結(jié)合物光片時(shí)間或底物顯色時(shí)間過長(zhǎng)。

　　3、洗滌不充分，樣品中有其他成分殘留或酶結(jié)合物殘留。

　　4、底物配置時(shí)間過久，底物受光照射時(shí)間較長(zhǎng)或被污染。

　　5、整批樣品放置時(shí)間過長(zhǎng)被污染或生長(zhǎng)細(xì)菌。

　　6、一夜醉從復(fù)使用時(shí)，未清洗干凈或消毒不。

　　7、配制溶液的水質(zhì)有問題。

　　四、ELISA試驗(yàn)中結(jié)果陰、樣對(duì)照顯色差距較小的原因

　　1、稀釋不準(zhǔn)。加樣量不準(zhǔn)。

　　2、加樣時(shí)個(gè)空軍被污染

　　3、底物不新鮮，配制時(shí)間較長(zhǎng)或被污染。

　　4、試劑效價(jià)下降或超過了試劑的有效使用期。

　　5、配制溶液的水質(zhì)有問題

　　五、ELISA試驗(yàn)中結(jié)果重復(fù)性不好的原因

　　1、樣品加入量多少不一，加樣時(shí)間又長(zhǎng)又短。

　　2、樣品加入后為充分混合均勻。

　　3、移液加樣器加樣量不一致。

　　4、酶標(biāo)儀濾光片不對(duì)。

　　5、操作過程中個(gè)別反應(yīng)孔中液體外濺。

　　6、不同批號(hào)試劑混用。

　　7、瓶蓋交叉使用

　　8、溫育條件和保溫時(shí)間不一致。

　　9、洗滌條件不一致。

　　10、顯色條件和時(shí)間不一致。

　　11、邊緣效應(yīng)，導(dǎo)致周邊孔(尤為4個(gè)較)較中央孔顯色為深。

　　12、將酶結(jié)合物或底物溶液加載了孔壁上，并有殘留。

　　13、酶結(jié)合物充分混勻就加入反應(yīng)孔中。

　　14、多加或少加了酶結(jié)合物、底物。

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