技術(shù)文獻(xiàn)
蛋白包被酶標(biāo)板方法:
蛋白包被酶標(biāo)板方法是一種常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù),用于檢測(cè)和定量分析蛋白質(zhì)的存在和濃度,該方法結(jié)合了酶標(biāo)記和固相免疫吸附技術(shù),具有高靈敏度和高特異性的優(yōu)點(diǎn)。下面將BUNSEN本生技術(shù)小編詳細(xì)介紹蛋白包被酶標(biāo)板方法的步驟和原理。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1.酶標(biāo)板涂覆:將需要檢測(cè)的蛋白質(zhì)溶液加入酶標(biāo)板孔中,使其在孔壁上吸附。通常使用96孔的酶標(biāo)板,每孔加入適量的蛋白質(zhì)液,然后在4°C下靜置一夜,使蛋白質(zhì)充分吸附。
2.陽(yáng)斷:將孔中的蛋白質(zhì)溶液倒掉,加入適量的陽(yáng)斷液(如牛血清蛋白、魚(yú)膠等) ,使其覆蓋整個(gè)孔底,陽(yáng)斷未被蛋白質(zhì)吸附的孔壁。
3,樣品孔加標(biāo)準(zhǔn)曲線;將待測(cè)樣品加入酶標(biāo)板中的相應(yīng)孔中,同時(shí)加入一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)品的濃度應(yīng)該覆蓋待測(cè)樣品的濃度范圍。
4.孔洗滌: 將酶標(biāo)板倒置,用洗滌緩沖液洗滌孔內(nèi)的殘留物質(zhì),去除非特異性結(jié)合物.
5.酶標(biāo)記抗體刊加標(biāo)準(zhǔn)曲線:加入與待測(cè)樣品相應(yīng)的酶標(biāo)記抗體,使其與蛋白質(zhì)結(jié)合。同時(shí)加入已知濃度的酸標(biāo)記抗體,構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線
6.孔洗滌: 同樣使用洗滌緩中液洗滌孔內(nèi)的殘留物質(zhì)
7.底物加入:加入底物液,使其與標(biāo)記抗體結(jié)合,產(chǎn)生顯色反應(yīng)。底物的選擇應(yīng)根據(jù)酶標(biāo)記抗體的酶活性來(lái)確定
8.反應(yīng)停止:加入反應(yīng)停止液,停止底物的反應(yīng)。停止液的選擇應(yīng)與底物相匹配.
9.讀取吸光度:使用酶標(biāo)儀讀取各孔的吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測(cè)樣品的吸光度值,計(jì)算出待測(cè)樣品中蛋白質(zhì)的濃度
原理解析
蛋白包被酶標(biāo)板方法的原理基于相免疼吸附技術(shù)和酶標(biāo)記技術(shù),先,在酶標(biāo)板上吸附待測(cè)蛋白質(zhì),形成蛋白質(zhì)包被層。然后,加入酶標(biāo)記抗體,使其與蛋白質(zhì)結(jié)合。酶標(biāo)記抗體可以是與酶結(jié)合的抗體,如辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗體。接下來(lái),加入底物液,底物與酶結(jié)合后發(fā)生顯色反應(yīng)。通過(guò)測(cè)量吸光度值,可以計(jì)算出待測(cè)樣品中蛋白質(zhì)的濃度。
蛋白包被酶標(biāo)板方法具有高靈敏度和高特異性的優(yōu)點(diǎn),通過(guò)合理選擇包被蛋白質(zhì)和酶標(biāo)記抗體,可以實(shí)現(xiàn)對(duì)特定蛋白質(zhì)的檢測(cè)和定量分析。該方法廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷和藥物開(kāi)發(fā)等域
總結(jié)起來(lái),蛋白包被酶標(biāo)板方法是一種可靠、靈敏目廣泛應(yīng)用的蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)。通過(guò)合理的實(shí)驗(yàn)步票和原理解折,可以準(zhǔn)確地檢測(cè)和定量分析待測(cè)樣品中的蛋白質(zhì)濃度。這種方法在生命科學(xué)研究和醫(yī)學(xué)診斷中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
注:以上總結(jié)僅供參考,本公司不承擔(dān)任何風(fēng)險(xiǎn),詳情請(qǐng)咨詢實(shí)驗(yàn)老師。
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標(biāo)簽:蛋白包被酶標(biāo)板 BUNSEN本生 酶標(biāo)板 試劑盒 Elisa 酶標(biāo)記抗體
原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司
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