技術(shù)文獻(xiàn)
BUNSEN本生淺談ELISA實(shí)驗(yàn)中的基質(zhì)效應(yīng)與過(guò)錯(cuò)
當(dāng)ELISA實(shí)驗(yàn)中的樣本值較低挨近試劑盒的靈敏度時(shí),就容易發(fā)生樣本值低于空白值的現(xiàn)象,特別是在血清和血漿樣本的查看。ELISA實(shí)驗(yàn)家對(duì)此現(xiàn)象的要素分析有兩個(gè)方面,一是基質(zhì)效應(yīng)、二是實(shí)驗(yàn)過(guò)錯(cuò) 。
一、基質(zhì)效應(yīng)
分析中,基質(zhì)指的是樣本中被分析物以外的組分,基質(zhì)常常對(duì)分析物的分析進(jìn)程有顯著的煩擾,并影響分析成果的準(zhǔn)確性,這些影響和煩擾被稱為基質(zhì)效應(yīng)。
仿照物與被測(cè)樣本在蛋白豐度、復(fù)雜性、pH等要素都會(huì)存在差異。當(dāng)單個(gè)樣本或少量樣本值低于空白值時(shí),可能是過(guò)錯(cuò)要素,這時(shí)應(yīng)增加重復(fù),操作技術(shù)。當(dāng)許多樣本都低于空白值時(shí),應(yīng)思考基質(zhì)效應(yīng)的影響,建立校正曲線予以修改。
ELISA試劑盒在開發(fā)進(jìn)程中,標(biāo)準(zhǔn)品不能選用人或動(dòng)物血清、血漿作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的稀釋液,只能選用其仿照物。當(dāng)樣本的基質(zhì)與其仿照物對(duì)比,下降抗原抗體的聯(lián)絡(luò),便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。構(gòu)成樣本值無(wú)法計(jì)算出數(shù)值,或許數(shù)值為負(fù)。
如比較常用的去掉基質(zhì)效應(yīng)的方法是,經(jīng)過(guò)已知分析物濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品,一同盡可能堅(jiān)持樣本中的基質(zhì)不變,建立一個(gè)校正曲線。
二、實(shí)驗(yàn)過(guò)錯(cuò)
過(guò)錯(cuò)分為三類,體系過(guò)錯(cuò)、隨機(jī)過(guò)錯(cuò)和過(guò)錯(cuò)過(guò)錯(cuò)。這三類過(guò)錯(cuò)中,體系過(guò)錯(cuò)對(duì)樣本值和空白值之間的差異無(wú)影響。
ELISA實(shí)驗(yàn)中的樣本值低于空白值在過(guò)錯(cuò)方面要來(lái)源于隨機(jī)過(guò)錯(cuò)和過(guò)錯(cuò)過(guò)錯(cuò)。
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原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司
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