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　　超敏化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品資料
 

　　產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

　　3-氨基鄰苯二甲酷阱是一種較強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，在存在辣根過(guò)氧化酶催化的條件下，可以被氧分子氧化成具有發(fā)光現(xiàn)象的中間體，當(dāng)中間體從激發(fā)態(tài)衰變到基態(tài)時(shí)可以產(chǎn)生明亮的化學(xué)熒光，常用于檢測(cè)固定在膜上的蛋白質(zhì)等生物大分子。其高靈敏度能夠檢測(cè)po別的抗原，發(fā)光信號(hào)強(qiáng)烈持久，可以使用照相技術(shù)(X-光膠片曝光) 或者其他成像方法檢測(cè)。

　　保存條件:

　　避光2-8°C保存.一年有效。

　　操作流程:

　　1、轉(zhuǎn)印膜及試劑準(zhǔn)備

　　1.1常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記抗體或核酸探針?lè)跤�、洗膜�?.2洗滌膜上的 HRP 標(biāo)記二抗時(shí)，新鮮配制發(fā)光工作液: 分別取等體積的溶液 A 和 B 混合，放置使之升到室溫，否則會(huì)減弱熒光強(qiáng)度。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低。

　　2、孵育及曝光

　　2.1用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜干燥。將膜浸入并與發(fā)光工作液充分接觸(約0.125ml/cm~膜)。室溫孵育 3-5分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)不會(huì)增加靈敏度，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過(guò)程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過(guò)少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會(huì)導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。2.2用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。2.3在X 光膠片暗盒內(nèi)面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來(lái)包裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。2.4在黑暗中放入X光膠片，分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)到數(shù)分鐘。顯影沖洗。

　　注意事項(xiàng):

　　1、為獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)務(wù)必優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，包括檢測(cè)樣品的用量、一抗、二抗稀釋度以及雜交膜及封閉試劑的選擇;

　　2、由于牛奶中含有內(nèi)源性生物素，在使用親和素/生物素系統(tǒng)時(shí)，封閉液中請(qǐng)避免使用奶粉;

　　3、在封閉緩沖液及所有抗體稀釋液中加入高質(zhì)量的吐溫-20(終濃度為0.05% )，以減少非特異性結(jié)臺(tái);

　　4、整個(gè)免疫印跡實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)確保印跡膜始終處于濕潤(rùn)狀態(tài)，避免干燥;

　　5、為獲得實(shí)驗(yàn)效果，抗體孵育及膜洗滌步驟中請(qǐng)使用搖床輔助完成;

　　6、在膜操作過(guò)程中請(qǐng)帶手套操作或者使用干凈的鑷子，避免蛋白污染;

　　7、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，請(qǐng)使用干凈的器材。非金屬設(shè)備沒(méi)有明顯劃痕，金屬設(shè)備表面無(wú)銹。銹可能導(dǎo)致膜上帶有污點(diǎn)或者高背景;

　　8、避光條件下，配制好的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)底物工作液可在室溫下穩(wěn)定8小時(shí)。如暴露于陽(yáng)光或其他強(qiáng)光下工作液會(huì)受影響。為獲得效果，可于棕色瓶中配制工作液，避免強(qiáng)光長(zhǎng)時(shí)間的照射。正常實(shí)驗(yàn)室燈光短時(shí)間照射不影響工作液的使用;

　　9、蛋白過(guò)量或長(zhǎng)時(shí)間曝光，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊;

　　10、發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見(jiàn)，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見(jiàn)但可使X光膠片曝光。不能簡(jiǎn)單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間。肉眼不可見(jiàn)的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使X光膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時(shí)。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光;

　　11、某些市售保鮮膜包裹印跡膜時(shí)會(huì)淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜;

　　溫馨提示:

　　為了您的自身安全，使用試劑，請(qǐng)做好防護(hù)，如穿實(shí)驗(yàn)服，帶手套等;

　　超敏化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過(guò)硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來(lái)維護(hù)和拓展市場(chǎng)，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司