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本生快訊：ELISA原理和具體試驗方法以及結果處理?
閱讀次數(shù)：15313 發(fā)布時間：2023/9/11 10:08:31

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　　ELISA原理和具體試驗方法以及結果處理?

　　ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV 的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物，經(jīng)第二次孵育后，酶結合物就會與次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發(fā)生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長: 450nm處測量O.D.值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標準, O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性操作步驟：

ELISA檢測試劑盒 TMB底物溶液本生試劑 IgM抗體 Elisa試劑盒

　　1. 使用，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。

　　2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

　　3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

　　4. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

　　5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

　　6. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。

　　7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。

　　8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

　　9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。

　　結果判斷與分析：

　　1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

　　2、以吸光度OD值為縱坐標(Y)，相應的S-100B標準品濃度為橫坐標(X)，做得相應的曲線，樣品的S-100B含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度，再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

　　3、檢測值范圍： 0-200ng/ml

　　4、敏感度：1.0ng/ml

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原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司