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　　BUNSEN本生：ELISA實驗不同樣本的處理
 

　　ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠需要品質(zhì)好的試劑，良好的儀器和正確的操作。 通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的步。

　　不同類型的樣本的處理方法：

　　1.血清

　　血清是常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。

　　用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。)4℃1000×g離心20min，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

　　采血過程中應(yīng)避免溶血，因為紅細(xì)胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。同時也應(yīng)避免細(xì)菌污染，因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。

　　2.血漿

　　用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。

　　常用的抗凝劑為EDTA等，檢測時還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。

　　3.細(xì)胞培養(yǎng)上清

　　取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

　　4.組織勻漿液

　　1) 將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。

　　2) 將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充分。

　　3) 將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))。

　　4) 吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

　　尿液、唾液等其他液體生物樣本。

　　1000×g離心20min，取上清即可檢測。

　　總的來說，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。

　　為了檢測的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。另外，還應(yīng)樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。

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原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司