技術(shù)文獻(xiàn)
培養(yǎng)基問(wèn)題解析:培養(yǎng)基中的添加物、PH值、保存
1、細(xì)胞培養(yǎng)用液:除培養(yǎng)基、血清、谷氨酰胺外,其他幾種液體也屬必須,不可省略:
(1)雙抗:200倍,(1ml/支)其終濃度為青霉素100U/ml;鏈霉素100ug/ml,-24度保存。
(2)L-谷氨酰胺:100倍,(1ml/支), 終濃度2mM,-24度保存。
(3)丙酮酸鈉:配制濃度50mM,4ml/支,終濃度為1mM/ml, -24度保存。
(4)Hepes液:配制濃度1M(5ml/支),一支Hepes加入到200ml 培養(yǎng)基中,終濃度為25mM/ml,常溫保存。
2、液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用,及使用方法
幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求,細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì),在缺少谷氨酰胺時(shí),細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置-20度冰凍保存,用加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 度 冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí),應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。
3、培養(yǎng)用液pH對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
由于,大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不相同,原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差,無(wú)限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。
但總體來(lái)說(shuō),細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些,偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長(zhǎng)。因此,我們?cè)谂渲婆囵B(yǎng)用液時(shí),可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.10um或0.22um濾膜過(guò)濾時(shí),溶液的PH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。
4、液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好?還是冷凍好?
要冷藏,因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí),其溶液的PH值會(huì)發(fā)生改變,溶液往往變堿,某些成分溶解也會(huì)受到影響對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中,通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 1年。
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原創(chuàng)作者:本生(天津)健康科技有限公司
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