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　　小鼠脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒使用說明
 

　　小鼠脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的Adiponectin的ELISA試劑盒。

　　本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，小檢出量為36.5pg/ml，與人TNF-α、TWEAK等均沒有交叉反應(yīng)，與大鼠Adiponectin有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

　　脂聯(lián)素(Adiponectin)，又稱Acrp30 (Adipocyte Complement-Related Protein)，adipoQ、apM1 (Adipose Most

　　Abundant Gene Transcript 1)或GBP28 (Gelatin-Binding Protein)，是一種分子量30kDa的糖蛋白，主要由脂肪細(xì)胞分泌，參與調(diào)控代謝和炎癥過程。成熟的小鼠脂聯(lián)素含有N端的膠原蛋白區(qū)域(66個(gè)氨基酸)和C端的C1q/TNF-α樣球狀區(qū)域(137個(gè)氨基酸)，與人和大鼠脂聯(lián)素分別具有83%和91%的氨基酸同源性。

　　脂聯(lián)素以90kDa的同源三聚體形式存在，其中兩個(gè)亞基以二硫鍵連接，第三個(gè)亞基以非共價(jià)鍵連接。兩個(gè)三聚體能夠通過共價(jià)鍵相連形成180kDa的六聚體復(fù)合物，六聚體又能形成分子量超過300kDa的HMW (High Molecular Weight)脂聯(lián)素。血漿中，不同脂聯(lián)素變體之間穩(wěn)定存在，不能發(fā)生互換。不同變體含量比例的高低具有明顯的生物學(xué)意義，在女性體內(nèi)，HMW脂聯(lián)素的濃度遠(yuǎn)高于男性，三聚體和六聚體的脂聯(lián)素濃度在男女之間也有差別。血漿中脂聯(lián)素水平通常占總體血漿蛋白的0.01%左右。脂聯(lián)素通過與7次跨膜受體Adipo R1和Adipo R2作用發(fā)揮生物學(xué)活性，Adipo R1表達(dá)廣泛，與脂聯(lián)素的剪切形式gAdiponectin具有更高的親和力;Adipo R2則主要表達(dá)在肝臟上，與兩種形式的脂聯(lián)素親和力基本相同。不同形式的脂聯(lián)素同樣還能與肌肉中的鈣黏蛋白13和一些生長因子相互作用。

　　脂聯(lián)素通過調(diào)控葡萄糖和脂肪酸代謝增強(qiáng)胰島素敏感性，它能夠減少血漿中葡萄糖和甘油三酯濃度，升高胰高血糖素，但并不改變胰島素濃度。在肝臟中，脂聯(lián)素能夠增強(qiáng)胰島素對(duì)糖異生的抑制作用。在骨骼肌中，脂聯(lián)素能夠促進(jìn)脂肪酸吸收并氧化，促進(jìn)葡萄糖吸收和乳酸鹽產(chǎn)生。脂聯(lián)素的不同變體能夠特異性的激活肝臟和肌肉中的AMPK和NFκB通路。在成人體內(nèi)，總脂聯(lián)素水平與代謝綜合征成負(fù)相關(guān)，HMW脂聯(lián)素水平的減少與肥胖、胰島素抵抗、脂肪酸氧化減少、血脂異常、冠狀動(dòng)脈疾病和動(dòng)脈粥樣硬化形成相關(guān)。在接受胰島素增敏劑噻唑烷二酮類藥物治療時(shí)，血漿中HMW脂聯(lián)素水平會(huì)出現(xiàn)升高。

　　脂聯(lián)素與受體結(jié)合后可以通過激活LKB1、CaMKKβ或SIRT1參與調(diào)控AMPK的活化，活化的AMPK可以使胰島素受體底物的酪氨酸殘基磷酸化，磷酸化的胰島素受體底物募集并激活PI3K/AKT通路。

　　本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中小鼠Adiponectin的濃度，其原理見圖1。小鼠Adiponectin特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠Adiponectin會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠Adiponectin抗體后，生物素化抗小鼠Adiponectin抗體與小鼠Adiponectin結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。小鼠Adiponectin濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中小鼠Adiponectin濃度。

　　雙抗體夾心ELISA原理圖　　一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。

　　保存條件：

　　標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效;試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。

　　注意事項(xiàng)：

　　由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。

　　洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶溶解后再配制工作液。

　　為標(biāo)準(zhǔn)品的性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。

　　TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。

　　加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。

　　小鼠脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

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