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新生牛血清樣品采集方法及應(yīng)用范圍

新生牛血清一般主要分為特級(jí)新生牛血清，優(yōu)級(jí)新生血清，標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清，其操作手法上又分為無(wú)菌采制，輻照滅菌，無(wú)菌過(guò)濾等，作為實(shí)驗(yàn)室試劑品;其規(guī)格上都是以"ml"為單位，常見(jiàn)規(guī)格有100ml、200ml、500ml，其主要作用是用于生化研究上，和培養(yǎng)基混合組成完全培養(yǎng)基，其采集方法主要分為以下步驟!

新生牛血清樣品采集方法

1、采集樣品前的準(zhǔn)備事項(xiàng)

A、器具

a、器具的準(zhǔn)備

保溫箱或保溫瓶，酒精棉，碘酒棉，棉簽、注射器及針頭(7×38，9×38,12×38，20×38等)。

b、輔助器材的準(zhǔn)備

保溫箱、離心管、試管架、記號(hào)筆、自封袋，膠布、封口膜、封條、冰(暖)袋等。

B、防護(hù)安全用品

在給新生牛血清采集時(shí)，我們會(huì)要求采集者都應(yīng)該注意防護(hù)安全，需要準(zhǔn)備好口罩、乳膠手套、防護(hù)服、防護(hù)帽、膠靴等。

2、采集樣品進(jìn)行時(shí)

A、操作步驟

a、由于新生牛屬比較小型體，所以我們只需將其穩(wěn)定，使其頭部稍前伸并稍偏向?qū)��?cè)。

b、對(duì)頸靜脈局部進(jìn)行剪毛、消毒，在這過(guò)程中，我們要安撫新生牛的情緒，以免新生牛出現(xiàn)不適而亂動(dòng)。

c、看清頸靜脈后，采血者用左手拇指(或食指與中指)在采血部位稍下方(近心端)壓迫靜脈血管，使之充盈、怒張。

d、右手持采血針頭，沿頸靜脈溝與皮膚呈45°角，迅速刺入皮膚及血管內(nèi)，如見(jiàn)回血，即證明已刺入;使針頭后端靠血管內(nèi)，如見(jiàn)回血，即證明已刺入;使針頭后端靠近皮膚，以減小其間的角度，近似平行地將針頭再伸入血管內(nèi)1～2厘米。

e、放開(kāi)壓迫脈管的左手，收集血液。采完后，以干棉球壓迫局部并拔出針頭，再以5%碘酊進(jìn)行局部消毒。

B、注意事項(xiàng)

a、采血完畢，做好止血工作，即用干棉球壓迫采血部位止血，防止血流過(guò)多。

b、牛的皮膚較厚，頸靜脈采血刺入時(shí)應(yīng)用力并瞬時(shí)刺入，見(jiàn)有血液流出后，將針頭送入采血管中，即可流出血液。

3、采集樣品成功后的保存及編號(hào)填寫(xiě)

a、待樣品采集完畢后，我們應(yīng)該要對(duì)其進(jìn)行血樣編號(hào)填寫(xiě)及保存，血樣采集后應(yīng)立即進(jìn)行編號(hào)，編號(hào)注意與被采畜禽一一對(duì)應(yīng)。

b、編號(hào)規(guī)則：注明采集地區(qū)、養(yǎng)殖場(chǎng)名稱(chēng)、動(dòng)物種類(lèi)(如采樣較多，可以一個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)一個(gè)自封袋，在自封袋上注明信息，在離心管上注明編號(hào))。

c、保存方法：一般選用塑料泡沫箱存放血液或血清。采血后針頭向上扎進(jìn)箱壁或放入離心管中存放;箱內(nèi)放入冰塊或暖水袋，保證箱內(nèi)20-25℃的室溫水平保存2小時(shí)以上即可析出血清;如果能在24小時(shí)內(nèi)及時(shí)送樣可2-8℃冷藏保存，若不能及時(shí)送樣化驗(yàn)需冷凍保存。

新生牛血清的應(yīng)用范圍

1、在說(shuō)到新生牛血清的應(yīng)用范圍前，我們需要先了解一下培養(yǎng)基與新生牛之間的關(guān)系，細(xì)胞培養(yǎng)基是培養(yǎng)環(huán)境中*重要的成分，由培養(yǎng)基和新生牛血清混合組成的完全培養(yǎng)基能夠提供細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)素、生長(zhǎng)因子和激素，并能調(diào)節(jié)培養(yǎng)體系的 pH 值和滲透壓。

2、目前主要有兩種基本的細(xì)胞培養(yǎng)體系，一種是使細(xì)胞在人工基質(zhì)上單層生長(zhǎng) ，即貼壁培養(yǎng)、微載體、片狀載體等培養(yǎng)方式)，另一種是使細(xì)胞在培養(yǎng)基中自由漂浮生長(zhǎng) 即懸浮培養(yǎng)，其中包括全懸浮培養(yǎng)和需要借助載體的培養(yǎng)。

3、除造血細(xì)胞系和其他一些細(xì)胞外，大多數(shù)脊椎動(dòng)物細(xì)胞均具有貼壁依賴(lài)性，必須在合適的基質(zhì)上培養(yǎng)，且該基質(zhì)必須經(jīng)過(guò)特殊處理，以便細(xì)胞粘附和伸展 (即組織培養(yǎng)處理)。但是，許多細(xì)胞系也可采用懸浮培養(yǎng)。

4、由于新生牛血清在兩種培養(yǎng)體系中發(fā)揮的作用有所區(qū)別，如貼壁培養(yǎng)血清主要提供貼壁因子和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而懸浮培養(yǎng)則主要提供促細(xì)胞生長(zhǎng)的因子;其主要的應(yīng)用范圍一般來(lái)說(shuō)，主要有以下這些!

5、新生牛血清在動(dòng)物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的應(yīng)用中依據(jù)細(xì)胞是否具有貼壁依賴(lài)性，分為動(dòng)物細(xì)胞全懸浮細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞微載體懸浮培養(yǎng);全懸浮細(xì)胞(如BHK21懸浮細(xì)胞株)可以在生物反應(yīng)器中直接進(jìn)行生產(chǎn)增殖，具有細(xì)胞自由生長(zhǎng)、培養(yǎng)環(huán)境均一、取樣簡(jiǎn)單、培養(yǎng)操作簡(jiǎn)單可控、放大方便、污染率和成本低的特點(diǎn)。

6、貼壁細(xì)胞(ST、Vero細(xì)胞等)在生物反應(yīng)器中懸浮培養(yǎng)時(shí)需要借助介質(zhì)表面，通常是微載體，其細(xì)胞所能達(dá)到的濃度和生產(chǎn)產(chǎn)品的產(chǎn)量依賴(lài)于微載體提供的生長(zhǎng)表面積;微載體為動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)提供了便利的表面，具有極大的培養(yǎng)表面積/體積比，它能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞高密度培養(yǎng)，是目前貼壁動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)使用的主要介質(zhì)。

7、在懸浮培養(yǎng)中，生產(chǎn)抗體藥物的CHO細(xì)胞、生產(chǎn)流感(禽流感)疫苗的MDCK細(xì)胞等已經(jīng)采用無(wú)血清培養(yǎng);但在BHK21細(xì)胞全懸浮培養(yǎng)的口蹄疫疫苗生產(chǎn)中，牛血清仍然被廣泛使用。

8、在南美和印度，口蹄疫疫苗生產(chǎn)通常添加10%左右成牛血清，而國(guó)內(nèi)企業(yè)采用低血清培養(yǎng)基彌補(bǔ)了基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基的不足;但是，牛血清中的一些促細(xì)胞生長(zhǎng)的成分還是無(wú)法被替代，通常會(huì)在培養(yǎng)基中添加1%-3%的牛血清，同時(shí)它還起著調(diào)節(jié)培養(yǎng)液酸堿度的作用。

9、為使培養(yǎng)體系保持良好的混合狀態(tài)和分散性，從而提高細(xì)胞生長(zhǎng)量，需對(duì)培養(yǎng)體系進(jìn)行攪拌，這時(shí)培養(yǎng)基中的牛血清即可以降低細(xì)胞的機(jī)械損傷;總而言之，牛血清因有著細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，所以具有極為重要的功能。

10、主要用于原代細(xì)胞培養(yǎng)、傳代細(xì)胞培養(yǎng)及病毒疫苗的研制和生產(chǎn);對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司