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　　本生資訊——ELISA試劑盒細(xì)節(jié)要求及樣本分析

　　◆根據(jù)采用的載體分為：

　　1.疏水性聚脂布作為載體;

　　2.聚苯乙烯微量板為載體;

　　3.硝酸纖維膜為載體。

　　ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應(yīng)結(jié)合起來的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原或抗體以后，既不影響抗原抗體反應(yīng)的特異性，也不改變酶本身的活性。因為ELISA試劑盒價格低廉且準(zhǔn)確性搞、反應(yīng)時間短等優(yōu)點，所以適合大批量的檢測，一般常常用于食品安全檢測方面。

　　◆ELISA需要遵循的幾個細(xì)節(jié)要點：

　　1、抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性;

　　2、抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;

　　3、酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的顏色反應(yīng)的深淺繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

　　◆注意事項：

　　1、標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。

　　2、凍結(jié)標(biāo)本溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛混合，不要在混勻器上強烈震蕩。

　　3、渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。

　　4、反復(fù)凍融會使蛋白效價降低，所以代測樣本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。

　　除了以上內(nèi)容，在ELISA試劑盒細(xì)節(jié)中，稀釋、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣也須搖勻，以試驗的均一性。

　　◆ELISA樣本分析

　　1.回溫平衡：

　　在加樣之約半小時左右，把試劑盒從冰箱中取出，放置在室溫下進(jìn)行平衡，平衡到用手握住試劑瓶感覺到不涼為止。如果時間匆忙的話也可以利用手握住試劑瓶進(jìn)行快速回溫。

　　2.反應(yīng)時間：

　　盡量把時間控制在需要的反應(yīng)時間，如果時間比較緊迫的話也可以把時間稍微延長幾分鐘，但不宜太長。顯色時間可根據(jù)顏色深淺進(jìn)行調(diào)整。

　　3.加樣：

　　取出相應(yīng)數(shù)量的微孔板放置在板架上，然后再對板孔進(jìn)行編號，再對需要稀釋的抗體或酶標(biāo)記物進(jìn)行稀釋。在板孔的六個孔內(nèi)分別加入標(biāo)準(zhǔn)品1-6，然后在剩下的板孔內(nèi)加入樣品分析液。然后再在每孔內(nèi)加入其余需要加入的液體。蓋上蓋板膜以后小幅度振蕩，然后放置在相應(yīng)的環(huán)境中進(jìn)行反應(yīng)。如是25℃環(huán)境反應(yīng)，則可放置在空調(diào)房內(nèi)進(jìn)行反應(yīng);如果是37℃環(huán)境下反應(yīng)，則必須放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱里進(jìn)行反應(yīng)，如果是4℃環(huán)境下反應(yīng)，則必須放置在2-8度冰箱里進(jìn)行培養(yǎng)。

　　4.洗板：

　　把板內(nèi)液體甩干，加入稀釋好的洗液250ul/孔，靜置10s或稍作振蕩后甩掉孔內(nèi)液體，再次加入洗液，以此重復(fù)3-4遍，洗完以后利用吸水紙把孔內(nèi)液體充分拍干后進(jìn)行下一步操作，如果孔內(nèi)有氣泡，則利用干凈的槍頭刺破。

　　5 結(jié)束實驗:

　　把加樣槍全部調(diào)到zui大量程,試劑盒放入冰箱,試管及離心管進(jìn)行清洗,關(guān)閉不用的儀器.

　　ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。

原創(chuàng)作者：本生（天津）健康科技有限公司